聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒使用說明書
DNA回收試劑盒使用說明書（PAGE回收）

本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的硅基質(zhì)材料和*的緩沖液系統(tǒng)，從聚丙烯酰胺凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩

選、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。配以特制的研磨杵和過濾柱，使你的操作更方便。

操作步驟：(所有離心步驟均可使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心)

*次使用前請先在15ml漂洗液中加入60ml無水乙醇。

1、將單一的目的DNA條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入1.5ml離心管中，稱取重量，用研磨杵將膠盡量擠壓碎。加入2倍體積的溶膠液吹打混勻（每100mg膠加入200ul溶膠液），75℃水浴30分鐘。

2、用1ml的去尖吸頭吸取混合物至過濾柱中（將膠一起吸入，溶液過多時(shí)可分次加入）。13,000rpm離心1分鐘。將收集管中的濾出液轉(zhuǎn)入新離心管。

3、取六倍體積結(jié)合液加入原離心管（每100mg膠加入600ul），清洗管壁后加入過濾柱中(溶液過多時(shí)可分次加入)，顛倒過濾柱或輕輕吹打幾次混勻，13,000rpm離心1分鐘。將兩次收集的濾出液混合。

4、將總濾出液混勻后加入吸附柱中（溶液過多時(shí)可分次加入），13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

5、向吸附柱中加入600μl漂洗液（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），13,000rpm離心30-60秒，倒掉廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600μl漂洗液，13,000rpm離心30-60秒，倒掉廢液。

7、將離心吸附柱放回收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂

洗液。將吸附柱開蓋置于室溫3-5分鐘，*晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實(shí)驗(yàn)。

8、將吸附柱放到一個(gè)干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量65–70℃預(yù)熱的洗脫緩沖液（20-30μl），室溫放置2分鐘。13,000rpm離心2分鐘收集DNA溶液。

注意：①為了增加回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，13,000rpm再次離心1分鐘。
      ②洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20μl，體積過小影響回收效率。
      ③洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間。

9、DNA回收產(chǎn)物直接下一步實(shí)驗(yàn)或者-20℃保存。

注意事項(xiàng)：

1、電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。

2、切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。

3、本試劑盒對(duì)<50bpDNA片段回收效率偏低（30%左右），如想回

收，應(yīng)加大結(jié)合液的體積，延長吸附和洗脫的時(shí)間。

4、回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越

小，回收率越低。